Centrifugacion de la gradiente
La técnica de capacitación mediante centrifugación en gradiente permite separar espermatozoides por centrifugación a través de capas de un coloide. Este coloide suele ser normalmente partículas de sílice rodeadas por polivinilpolipirrolidona (PVP) y se suelen usar gradientes de dos densidades (45-90%) o tres (45-60-90%).



Metodología
Tras la obtención de la muestra seminal, esta es sometida a un lavado simple. A continuación se prepara el gradiente de densidad: en un tubo cónico de centrífuga ligeramente inclinado se depositan con sumo cuidado las diferentes capas del gradiente de mayor a menor densidad evitando que se mezclen. Una vez hecho esto, sobre el gradiente formado se aplica la muestra y se centrifuga a 300g durante 20 minutos aproximadamente (dependiendo del protocolo este valor puede variar). Del tubo ya centrifugado se aspira la parte inferior que será la más enriquecida en espermatozoides móviles progresivos. Esta fracción se resuspende en 0.5 a 1ml de cultivo y se vuelve a centrifugar esta vez 5 minutos a 400 g, el sobrenadante se decanta y el pellet obtenido se vuelve a resuspender en 0.5 ml de cultivo concluyendo así la capacitación.
Es importante observar si en la muestra a capacitar encontramos cuerpos gelatinosos ya que, al ser más densos y de gran tamaño frente a los espermatozoides, pueden romper las capas del gradiente durante la centrifugación y facilitar el paso de componentes no deseados hacia el fondo del tubo disminuyendo considerablemente la eficacia de la capacitación.
Ventajas
Entre las principales ventajas de esta técnica frente a otras técnicas de capacitación se puede destacar la alta tasa de recuperación de espermatozoides y la capacidad de aislarlos de otros residuos reflejada en fracciones mucho más limpias. Es por ello, por lo que está indicada para muestras oligozoospérmicas, astenozoospérmicas y con abundantes células y detritos.

Inconvenientes
Se trata de una técnica que requiere precisión y cuidado en la preparación de los gradientes. Es uno de los métodos más caros. Entraña un posible riesgo de endotoxinas. Es importante mencionar que con este sistema no se puede usar Percoll.

Centrifugación diferencial.
En este método, el tubo de centrífuga se llena con una mezcla uniforme problema. Tras la centrifugación se obtienen dos fracciones: un pellet que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no sedimentado. Es una técnica muy útil, sobre todo para aislamiento de células y orgánulos subcelulares. Es un tipo de separación logrado en base al tamaño de las partículas.
Esta técnica consiste en someter a una muestra heterogénea de partículas a fuerzas de centrifugación crecientes por períodos de tiempo crecientes. Los precipitados obtenidos luego de cada centrifugación estarán enriquecidos en una determinada partícula.
Para lograr la separación, los coeficientes de sedimentación de las partículas deben diferir en al menos un factor de tres (moléculas con s mayores precipitan primero).

La centrifugación es un método que utiliza la propiedad de sedimentación de partículas con base en la masa de las moléculas para la separación de partículas de una solución. Una vez obtenido el lisado o homogenado celular se ha de proceder a su fraccionamiento. Una de las técnicas más empleadas es la centrifugación. Se basa en hacer girar el tubo a gran velocidad de forma que se produzca la acumulación en el fondo del mismo de las partículas que tienden a hundirse por tener una densidad menor que la del medio en que se encuentran. Así, después de la centrifugación la muestra, homogénea, se habrá separado en dos fracciones : sobrenadante (supernatant), fracción homogénea que no ha sedimentado, y el sedimento (pellet) que ha quedado adherida al fondo del tubo.

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL:
La centrifugación diferencial se basa en la existencia de diferentes partículas en la suspensión que difieren en su densidad de la del medio. Si se centrifuga en condiciones suaves (poco tiempo, poco fuerza de aceleración) sedimentarán las partículas mayores y/o más densas. Cuando el sobrenadante de la primera centrifugación es centrifugado de nuevo en condiciones de mas tiempo y más fuerza de aceleración sedimentan de nuevo las partículas más densas presentes y así sucesivamente. Se pueden aplicar condiciones crecientes de severidad en la centrifugación y obtener una colección de sedimentos que corresponden sucesivamente a fracciones de partículas de diferente tamaño y/o densidad.

Ultra centrifugación
Si un recipiente con agua y arena es agitado y luego se deja inmovil, la arena rapidamente sedimentara al fondo de del recipiente debido a la influencia de la fuerza de gravedad. cuando una macromolecual se encuentra en solucion, expermienta la misma gravedad, sin embargo no se observa sedimentacion de esta. Solamente cuando esta sujeta a grandes aceleraciones la sedimentacion de la macromolecula comenzara a imitar los granos de arena.
La ultracentrifugacion, desarrollada en 1923, puede lograr velocidades de rotacion tan altas como 80000 rpm, capaces de generar fuerzas centrifugas de 600.000 g.
a. Sedimentación
la relacion de sedimentacion de una particula dependera de su masa. esta relacion puede caracterizar particulas como por ejemplo las subunidades del ribosoma. Para la realizacionde este procedimiento se utilizan ultracentrifugas, que pueden contar con regulacion de la temperatura y vacio.

b. Ultra centrifugación Preparativa
Las ultracentrifugas preparativas, como lo indica su nombre son para la reparacionde muestras. los rotores preparativos pueden contener tubos para muetras con ejes paralelos, en angulo o perpendiculares, al eje de rotacion del motor, dependiendo de la aplicacion que se les quiera dar. Se utiliza tambien en estos casos la ultracentrifugacion en gradiente de densidad, en la cual en el mismo tubo se forman fases de acuerdo al coeficiente de sedimentacion, quedando aquellos componentes con mas lenta sedimentacion en la prte superior y los de mayor sedimentacion abajo